能合成和分泌GABA的永生化星形胶质细胞的构建

摘要：

目的 构建能合成和分泌GABA的永生化星形胶质细胞.方法 在原代培养的大鼠星形胶质细胞内转入猴肾病毒40大T抗原基因(simian virus 40 large T antigen gene,SV40Tag)使其永生化(这一部分由同济医院麻醉科田玉科教授实验室完成),并在这些细胞内转入含谷氨酸脱羧酶65亚型(glutamate de carboxylase 65,GAD65)目的基因质粒,对照组转染含β-gal(β-半乳糖苷酶,对照质粒)质粒;应用免疫组化及Western-blot方法检测转染后细胞内GAD65的表达水平;应用毛细管电泳法检测这些细胞内外的氨基丁酸(GABA)含量;用全细胞膜片钳记录构建细胞的GABA电流.结果 与转染β-gal的对照组比较,转染GAD65的实验组细胞在具备胶质细胞特性之外,能稳定表达GAD65,细胞内的GAD65含量明显增加;同时细胞内的GABA含量明显高于对照组;实验组细胞外液GABA的浓度明显高于对照组;实验组和对照组均能记录到GABA电流,说明构建细胞功能完善.结论 永生化的星形胶质细胞中转入GAD65质粒后具备胶质细胞特性,构建细胞能稳定表达GAD65,并且能合成和分泌GABA.

关键词：谷氨酸脱羧酶65亚型、氨基丁酸、星形胶质细胞

所属期刊栏目：14

分类号：R741(神经病学与精神病学)

在线出版日期：2007-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：228-231,234