基于miRNA组学探讨慈菇消脂方调控TGF-β1诱导LX2细胞活化的作用机制
目的:运用生物信息学方法筛选慈菇消脂方干预人肝星状LX2细胞中差异表达微小RNA(micro RNA,miRNA),并进一步探讨差异miRNA对活化LX2细胞刺猬(Hedgehog,Hh)信号通路的影响及慈菇消脂方含药血清的干预机制.方法:CCK-8法检测不同浓度含药血清,不同时间处理对细胞活性影响,筛选最佳作用时间和作用浓度.6％慈菇消脂方含药血清干预LX2细胞72 h,以空白血清组作为正常对照,进行总RNA提取、RNA质检、文库构建,使用测序平台为illumina HiSeqTM2500进行高通量测序,以P＜0.05的标准筛选差异miRNA,利用miRanda和RNAhybrid两个软件进行miRNA靶基因预测,得到miRNA和靶基因间的对应关系.对差异miRNA靶基因分别进行Gene Ontology和KEGG富集分析,筛选Hh信号通路差异表达miRNA.转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立LX2细胞活化模型.试验随机分为正常对照组、模型对照组、6％慈菇消脂方含药血清组、环靶明脂组、微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)过表达组及其阴性对照组.CCK-8法检测细胞增殖情况;Q-PCR和Western-blot技术检测细胞中miR-199a-5p、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型-胶原(Col-Ⅰ)及Hh信号通路相关蛋白表达,以此探究miR-199a-5p对活化LX2细胞Hh信号通路的影响及慈菇消脂方含药血清的干预机制.结果:与正常对照组比较,模型对照组细胞活力显著升高(P＜0.01),miR-199a-5p 表达上调(P＜0.01),Sonic 刺猬信号通路(Sonic Hedgehog,Shh)、脑胶质瘤相关癌基因 1(Glioma related oncogene homology-1,Gli-1)、Gli-2、Col-Ⅰ、α-SMA蛋白及mRNA表达显著上调(P＜0.01);与模型对照组比较,6％慈菇消脂方含药血清组细胞活力显著降低(P＜0.01),miR-199a-5p表达显著下调(P＜0.01),Gli2、α-SMA蛋白表达显著下调(P＜0.05).结论:慈菇消脂方含药血清可以抑制TGF-β1诱导的LX2细胞活化,其机制可能通过下调miR-199a-5p进而抑制Hh信号通路蛋白表达发挥作用.
慈菇消脂方、生物信息学、微小RNA-199a-5p、刺猬信号通路、肝星状细胞
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S666.4;R737.9;R285.5
国家自然科学基金81860821
2023-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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