壮药汗衣台有效成分古伦宾、非洲防己碱对HBV启动子的影响
目的:通过汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对4种HBV启动子的影响研究,进一步探讨汗衣台抑制HBV病毒复制的可能机制.方法:采用CCK8法检测古伦宾、非洲防己碱对HepG2细胞的增殖毒性,以确定它们的安全浓度;人工合成法、基因扩增法分别构建经典型和突变型的4种HBV启动子(S1p,S2p,Cp,Xp)调控的含荧光素酶报告基因的表达重组质粒(pCp-Luc,pS1 p-Luc,pS2p-Luc,pXp-Luc),脂质体转染HepG2细胞8h后,分别加入不同安全浓度的古伦宾、非洲防己碱进行干预处理,于24h、48h结束干预后进行双荧光素酶检测.结果:古伦宾对经典型S1 p、S2 p、Cp、Xp分别为中度(16.4％)、轻度(10.0％)、重度(20.2％,p=0.298)、明显抑制(8.9％,p=0.047);非洲防己碱对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(16.8％)、中度(17.7％)、重度(25.2％,p =0.199)、明显抑制(8.6％,p=0.05);阳性对照干扰素组对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(15.1％)、重度(22.3％)、重度(24.0％)和中度抑制(6.2％);拉米夫定对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为重度(20.7％)、中度(13.4％)、中度(12.1％)和明显抑制(9.9％,p =0.046).基因扩增法构建的4个HBV启动子S1p,S2p,Cp,Xp分别有1,1,4,4个突变点,突变后的启动子转录效率提高1.3倍～2.2倍(48 h组),但是,药物的抑制效率没有按相应比例提高,从这一角度来看,古伦宾、非洲防己碱、干扰素和拉米夫定对突变启动子的抑制作用除对Xp有明显提高外(2.3倍～3.5倍),对其余突变启动子均无明显变化甚至抑制作用下调(1/10 ～2/5).结论:汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对经典型和突变型的4种HBV启动子Cp,S1p,S2p,Xp均有不同程度的抑制作用,与干扰素和拉米夫定类似.四种药物对Xp尤其是突变型Xp有明显抑制作用,其中以干扰素最显著,提示汗衣台除了通过抑制启动子活性抗HBV以外,可能还通过抑制Xp启动子活性,继而下调X蛋白的表达,从而对HBV相关性肝癌的发生有预防作用.
汗衣台、有效成分、HBV启动子、荧光素酶报告基因、重组质粒
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R735.7;R512.62;R392-33
国家自然科学基金81560678
2019-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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