迷迭香酸抑制自噬诱导HepG2细胞凋亡的作用研究

摘要：

目的:观察迷迭香酸(RA)对HepG2细胞凋亡和自噬的作用,探讨自噬与凋亡之间的相互作用.方法:用不同浓度迷迭香酸作用于HepG2细胞24h、48h、72h.MTT法检测细胞存活率,观察迷迭香酸对HepG2细胞核形态的影响,流式细胞术检测细胞凋亡变化,台盼蓝染色法观察细胞自噬泡情况,透射电镜观察HepG2细胞的自噬变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白CleavedCaspase-3、Bcl-2和自噬相关蛋白(LC3)、p62的表达水平.采用迷迭香酸+3-甲基腺嘌呤(3-MA,自噬抑制剂)或迷迭香酸+雷帕霉素(RAP,自噬诱导剂)分别培养处理HepG2细胞,观察细胞增殖、细胞凋亡情况及相关蛋白表达变化.结果:与对照组相比,迷迭香酸(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)均能降低HepG2细胞的存活率,诱导HepG2细胞发生凋亡,具有量效和时效关系,减少细胞内自噬泡和自噬小体,降低LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的比值,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3、p62蛋白的表达.与迷迭香酸25μmoVL处理组相比,迷迭香酸25 μmol/L+ 3-MA l.0μM/mL应用可诱导HepG2细胞凋亡增加,可进一步减少细胞内自噬泡和自噬小体数目,降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,进一步抑制HepG2细胞的自噬水平,减少Bcl-2的表达,增加Cleaved Caspase-3和p62表达;迷迭香酸25μmol/L+ RAP 1.0μM/mL处理HepG2细胞,增加细胞内自噬泡和自噬小体数目,升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,可以抑制和逆转迷迭香酸诱导的细胞自噬水平下降,增加Bcl-2的表达,减少Cleaved Caspase-3和p62表达,细胞凋亡水平下降,这说明抑制或增强自噬时,迷迭香酸能改变对HepG2细胞的凋亡影响作用.结论:迷迭香酸可通过抑制自噬促进HepG2细胞的凋亡.

关键词：迷迭香酸、HepG2细胞、自噬、凋亡

所属期刊栏目：35

分类号：R735.7;R363;X705

资助基金：湖南省中医药科研重点项目;株洲市科技局项目

在线出版日期：2019-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：57-63