一种特殊虫草与冬虫夏草的表型和DNA条形码特征比较分析及鉴别方法研究

摘要：

目的:通过对子座和虫体部分进行表型与DNA条形码序列分析,探讨一种发现于四川的特殊冬虫夏草(以下简称特殊虫草)与常见冬虫夏草的区别.方法:体视显微镜观察虫草样品的外部特征;聚合酶链式反应(PCR)扩增得到真菌部位内转录间隔区(ITS)序列和宿主蝙蝠蛾昆虫的细胞色素氧化酶Ⅰ(COⅠ)序列;利用CodonCode Aligner和MEGA软件进行序列分析,建立邻接(NJ)系统进化树;对ITS序列进行限制性内切酶图谱分析,寻找具有鉴别意义的酶切位点,并通过PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)鉴别进行验证.结果:特殊虫草与常见冬虫夏草相比,虫体头部的颜色明显不同;子座真菌的ITS序列存在 7 个差异位点,虫体COⅠ序列存在56 个差异位点,基于ITS序列及COⅠ序列的NJ系统进化树分析均显示,两者不能聚为一支;在两者差异区域,冬虫夏草存在 1 个XhoⅠ的酶切位点,因此其ITS序列的PCR产物可被限制性内切酶XhoⅠ切割为 2 个片段,特殊虫草不能被XhoⅠ切割,所以酶切前后的PCR产物在琼脂糖凝胶图上没有变化,通过该方法可对两者进行鉴别.结论:发现了一种特殊虫草,其与常见冬虫夏草的真菌子座和宿主蝙蝠蛾昆虫部分均有明显不同,并为鉴别两者提供了有效方法.

关键词：冬虫夏草、限制性内切酶、内转录间隔区、细胞色素氧化酶Ⅰ

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分类号：R282(中药学)

资助基金：国家重大新药创制科技重大专项;国家药品监督管理局中药材;饮片质量控制重点实验室项目;国家药品监督管理局中药质量研究与评价重点实验室常见与重要中药材;饮片DNA分子鉴定研究项目

在线出版日期：2023-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1872-1877