家鸡MDH2基因克隆、生物信息学分析及原核表达载体构建

摘要：

目的:初步探索家鸡苹果酸脱氢酶 2 编码基因MDH2 的序列特征、组织表达及原核表达情况.方法:采用克隆技术与测序技术获取家鸡MDH2 基因互补脱氧核糖核酸(cDNA)全长,使用多种在线软件对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测该基因在不同组织中的表达情况,利用同源重组技术构建pET32a(+)-MDH2 表达载体,使用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达.结果:从新鲜家鸡砂囊内壁中成功克隆到 MDH2 基因,序列长度 1120 bp,其开放阅读框(ORF)为 1014 bp,编码 337 个氨基酸;MDH2 蛋白相对分子质量为 35.95 kDa,理论等电点 9.17,属于稳定碱性疏水性蛋白.MDH2 蛋白含 25 个磷酸化位点;二级结构主要包括α-螺旋、β-螺旋、无规则卷曲,无信号肽和跨膜结构域.MDH2 基因在心、肝、脾、肺、肾、砂囊内壁中都有表达,其中心、肾、砂囊内壁中表达量较高,pET32a(+)-MDH2 重组蛋白主要是以包涵体的形式存在.结论:MDH2 基因在家鸡体内广泛表达,但其在各组织/器官中表达趋势不同,提示其功能可能具有广泛性与多重性.

关键词：MDH2、基因克隆、生物信息学、原核表达

所属期刊栏目：25

分类号：R282.7(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;中国中医科学院科技创新工程项目

在线出版日期：2023-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1646-1654