龟甲的特异性PCR及高分辨率熔解曲线技术鉴别方法研究

摘要：

目的:建立高效、稳定的龟甲Testudinis Carapax et Plastrum DNA鉴别方法.方法:利用龟甲的特异性聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)鉴别方法和高分辨率熔解曲线(HRM)鉴别方法,根据龟甲及其混伪品COI序列差异,寻找特异性单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点设计鉴别引物,并对PCR反应条件进行优化;并使用通用引物扩增CO1区域,产物直接进行HRM分析.结果:当退火温度为60℃,循环次数为35,使用设计的龟甲特异性鉴别引物GJ-360.F/R进行PCR扩增,经扩增均获得约360 bp特异性鉴别条带,混伪品皆无条带;使用通用引物RonM-tl和Vl-tl进行PCR扩增,产物使用HRM分析,龟甲药材在模板DNA质量浓度为3.5～87.9 ng·μL-、引物浓度为0.2 μmol· L-、镁离子浓度为2.0 mmol· L-的条件下,龟甲药材标准熔解曲线为双峰,其Tm均值分别为(83.15 ±0.76)、(87.53 ±0.69)℃.结论:特异性PCR和HRM均可作为一种快速准确鉴别龟甲正伪品的鉴定方法.

关键词：龟甲、特异性聚合酶链式反应、分子鉴定、高分辨率熔解曲线

所属期刊栏目：21

分类号：R282.74;R284(中药学)

资助基金：中央本级重大增减支项目2060302;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项ZZ10-008

在线出版日期：2019-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1215-1220