金铁锁PtCYP450基因的克隆及原核表达

摘要：

目的:从金铁锁Psammosilenetunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu中克隆细胞色素PtCYP450酶基因,进行序列分析和原核表达.方法:根据已获得的金铁锁转录组数据,设计PtCYP450基因全长扩增引物,利用RT-PCR方法获得金铁锁PtCYP450基因的全长cDNA序列,并进行TA克隆、测序及序列分析;构建金铁锁PtCYP450-03基因的原核表达载体pEASY-E1-CYP450,转入BL21(DE3)Chemically Competent Cell中,在ArtMediaTM Protein Expression培养基中进行蛋白表达.结果:获得全长1612 bp的金铁锁CYP450 cDNA,其开放阅读框(ORF)为1560 bp,编码519个氨基酸;序列分析及系统发育分析表明,PtCYP450基因属于CYP710家族成员.构建了pEASY-E1-CYP450重组质粒,获得稳定的原核表达体系,SDS-PAGE结果表明所表达的蛋白与预测的蛋白大小一致.结论:成功克隆了金铁锁PtCYP450基因,构建了稳定的pEASY-E1-CYP450原核表达体系,为进一步研究金铁锁中三萜皂苷合成代谢途径及其关键酶表达模式奠定基础.

关键词：金铁锁、PtCYP450、基因克隆、原核表达、序列分析

所属期刊栏目：18

分类号：R9 ;R3

资助基金：国家自然科学基金81260609,81560613;云南省自然科学基金2014FD035,2015FB205-015;中央本级重大增减支项目2060302

在线出版日期：2016-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：758-761,771