党参ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要：

目的:建立党参的ISSR-PCR反应体系,为今后利用ISSR标记技术进行党参鉴定及种质遗传多样性分析提供一个标准化程序.方法:采用试剂盒法提取党参基因组DNA为模板,通过单因素实验分析了ISSR-PCR反应体系中MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、模板DNA用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响.结果:建立了重复性好,分辨率高的ISSR-PCR反应体系,即在25 μL反应体系中,含有10×PCR Buffer缓冲液2.5μL,MgCl22.0 mmol·L-1,dNTPs 0.5 mmol· L-,引物0.4 μmol·L-,Taq DNA聚合酶1.0U,模板DNA为30 ng;扩增程序为:94℃预变性5min,然后94℃变性30 s,51.7℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,共计35个循环,循环结束后在72℃延伸7 min,4℃保存.结论:建立了适用于党参的ISSR-PCR反应体系,为应用ISSR技术鉴定党参种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础.

关键词：党参、ISSR-PCR、反应体系、优化

所属期刊栏目：16

分类号：S68;S5

资助基金：“十二五”国家科技支撑计划课题2011BAI05B02

在线出版日期：2014-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：551-555