双丁酰环腺苷酸通过蛋白激酶Wee1B调控小鼠1-细胞期受精卵的发育研究
目的 探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)激活剂双丁酰环腺苷酸(dual dibutyryl cyclic AMP,dbcAMP)调控蛋白激酶Wee1B蛋白对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为进一步研究母源性因子Wee1B在早期胚胎发育过程中的作用提供理论基础.方法 将2 mmol/L dbcAMP作用于小鼠1-细胞期受精卵1 h,并显微注射Wee1B-mRNAs,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Wee1B-WT/KD注射组、Wee1B-S15A/D注射组,继续在M16培养基中培养.相差显微镜下观察小鼠受精卵的形态变化和卵裂情况,放射自显影测定各期细胞有丝分裂促进因子(MPF)活性,Western blotting方法 检测Wee1B蛋白的表达、CDC2-pTyr15和Wee1B-pSer15的磷酸化水平.结果 小鼠受精卵在有dbcAMP存在时,G1、S、G2和M各细胞周期均检测到磷酸化的Wee1B表达,非磷酸化条带在G2期和M期才能检测到;各组受精卵卵裂出现时间延迟,卵裂率显著降低;hCG注射后35 h内,MPF活性一直处于低水平,CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化趋势相一致.结论 dbcAMP激活PKA后,PKA磷酸化Wee1B蛋白的S15位点,Wee1B活性增加,阻滞受精卵分裂,本研究提示Wee1B蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点,可以更好地认识早期胚胎发育的分子事件.
Wee1B、双丁酰环腺苷酸、蛋白激酶A、有丝分裂促进因子、小鼠受精卵
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Q954.4(动物学)
国家自然科学基金资助课题81270698、31371173、81401199;辽宁省科学技术计划项目2015020697
2017-09-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
34-38,169
