多重荧光定量PCR测定疟原虫方法建立

摘要：

目的 建立可同时检测四种疟原虫的多重荧光定量PCR方法.方法 PCR扩增四种疟原虫目的片段,克隆并构建标准质粒,进行梯度稀释.体系按浓度加入五重引物探针,对临床四种疟原虫阳性血样及单一腺病毒和肺炎支原体阳性血样、人基因组进行特异性检测.将本地区优势虫种恶性疟及间日疟阳性血样混合并检测.每个反应做一式三份验证重复性.检测标准品梯度浓度,获得体系最低检测限.结果 成功构建四种疟原虫标准质粒.对20份样本进行检测,其中15份恶性疟,3份间日疟,1份三日疟,1份卵形疟,与原有确证结果一致.对单一腺病毒及肺炎支原体阳性血样、人基因组检测结果均为阴性.恶性疟及间日疟阳性血样混合检测显示3条特异性扩增曲线.三个复孔的变异系数在0.17～4.96之间.恶性疟可检测到102 copies/mL,间日疟、三日疟、卵形疟可检测到103 copies/mL.结论 建立五重荧光定量PCR检测四种疟原虫特异性及重复性均较好,灵敏度高,可用于疟原虫快速筛选及分型鉴定.

关键词：多重荧光定量PCR、疟原虫、蚊传染病、疟疾

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分类号：R440(诊断学)

资助基金：浙江出入境检验检疫局重点科研计划项目计划2014-ZKZ-006

在线出版日期：2016-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：4-6,10,封3