血竭素通过影响MAPK通路抑制神经胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡
目的 观察天然药物血竭素高氯酸盐(Dracorhodin perchlorate,Dp)对胶质瘤细胞U251和神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y抑制作用,并探讨其作用机制.方法 于2013年12月～2014年12月期间采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度Dp(0～100 μM)z作用后细胞生长的抑制率;DAPI染色观察细胞形态学的变化;流式细胞术(FCM)检测Dp作用后细胞周期分布情况;Western blot检测凋亡相关蛋白以及增殖相关通路,并用小分子抑制剂确认通路靶点活化情况.结果 血竭素高氯酸盐可以显著抑制胶质瘤细胞U251和神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的增殖(P＜0.05),并使细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞周期相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达随Dp浓度增加而减少,与0μM组比,差异有统计学意义(P＜0.05).增殖相关通路研究显示,血竭素高氯酸盐作用细胞24 h后Bax的表达明显增加,Bcl-2表达减少.p53蛋白的表达随药物作用浓度增加而上调,Caspase-3和Caspase-9活化形式表达随药物作用浓度增加而上调.下游信号通路显示,加入Dp后,MAPK通路中JNK和p38的磷酸化增强,加入对应的抑制剂SP600125 (JNK抑制剂)和SB203580(p38 MAPK抑制剂)后,可以减少由Dp所引起的凋亡.加入不同的凋亡抑制剂后,z-DEVD-fmk和z-LEHD-fmk对Dp诱导凋亡的拮抗作用最明显(P＜0.05).结论 血竭素可以抑制胶质瘤细胞U251和神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的增殖,阻滞细胞于G0/G1期.血竭素高氯酸盐可以诱导细胞发生内源性凋亡,并且通过活化Caspase-3以及Caspase-9诱导细胞凋亡,加入凋亡抑制剂z-DEVD-fmk和z-LEHD-fmk可在一定程度上减少凋亡细胞比例.研究机制表明Dp可能通过活化MAPK通路中的JNK和p38发挥促进凋亡的作用,加入对应抑制剂后会显著降低Dp所诱导的凋亡.
血竭素、胶质瘤、凋亡、MAPK通路、JNK通路
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R739.41(肿瘤学)
浙江省医药卫生科技计划项目资助2013KYA183
2015-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
11-15,封3
