茄匍柄霉菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

为了准确检测病残体内茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)DNA含量在土壤内的动态变化,本研究根据三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列,设计并筛选特异性引物Stem-g7F/Stem-g7R,能从靶标基因组DNA中特异性扩增出大小为150 bp的目的片段.建立的Stemphylium solani实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测体系的灵敏度比常规PCR高1 000倍,且特异性良好.标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.992.利用所建立的qRT-PCR方法对病残体进行检测发现,病残体DNA初始拷贝数为3.69×109拷贝数/g,经过温度27℃、80％湿度下处理30 d病残体DNA含量下降至1.21×106拷贝数/g,而在温度27℃、20％湿度下含量为1.29×1010拷贝数/g.因此,建立的S.solani的qRT-PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测病残体S.solani的含量,为番茄匍柄霉叶斑病的早期预防和流行监测提供有效的技术手段.

关键词：茄匍柄霉菌;实时荧光定量PCR;湿度;病残体

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分类号：S432.1(病虫害及其防治)

资助基金：国家大宗产业技术体系;国家重点研发计划;中国农业科学院科技创新工程CAAS-ASTIP-IVF-CAAS;农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室项目;宁夏瓜菜产业协同创新中心

在线出版日期：2021-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：618-625