甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因克隆及其实时荧光RT-PCR检测
甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV)引起的甘蔗黄叶病是一种新的全球性病毒病害.本文以YLSCPF1和YLSCPR591为引物,采用RT-PCR方法克隆了甘蔗黄叶病毒福建分离物(CHN-FJ1)外壳蛋白(CP)基因,编码196个氨基酸.分析不同地理来源的SCYLV病毒分离物cp基因核苷酸及其推导编码的氨基酸序列,同源性达95%以上.根据cp基因的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立了SCYLV的TaqMan实时荧光RT-PCR方法.结果表明,检测下限为初始质粒模板DNA1 000拷贝/μL(约3.61 fg/μL),比常规PCR方法的灵敏度提高100倍.检测甘蔗花叶病毒、宿根矮化病菌和黑穗病菌,没有典型的扩增曲线和无Ct值.应用实时荧光RT-PCR、常规RT-PCR和组织印迹免疫杂交(TBIA)对田间甘蔗叶片样品进行检测,阳性检出率分别为100%、61.5%和69.2%,表明该方法比常规RT-PCR和TBIA具有更高的灵敏度,适合于对SCYLV的检测.
甘蔗黄叶病毒、外壳蛋白、序列分析、实时荧光RT-PCR
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S432.41;S435.661(病虫害及其防治)
现代农业产业技术体系建设专项资金项目nycytx-024;公益性行业农业科研专项nyhyzx07-019;福建省自然科学基金资助项目2008J0048
2011-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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