嵌套引物P1/P7-U3/U5检测葡萄黄化(stolbur) 植原体时扩增出的额外片段分析

摘要：

当采用嵌套引物P1/P7(U5/P7)-U3/U5的巢式PCR检测植原体时,伴随着正常的0.85 kb片段还经常扩增出一条额外片段.与其它常见的非特异性片段不同,该额外片段十分稳定,与正常片段总是同步出现,二者的强度呈正比.经测定,额外片段的大小为0.36kb.迄今,这一现象仅在采用P1/P7(U5/P7)-U3/U5引物的巢式PCR中出现.在采用P1/P7、U5/P7或U3/U5引物的常规PCR中从未出现过.另外,已知这一现象至少在葡萄黄化stolbur和榆黄化植原体的检测过程中出现.对该现象产生的原因进行了深入研究,方法是将额外片段从凝胶中分离出来,用不同的引物在不同的条件下进行重新扩增,同时结合已知的植原体16S rRNA基因序列进行综合分析判断.结果表明,该额外片段源于植原体16S rRNA基因上存在的一个与U5引物部分互补的位点.对额外片段的测序结果进一步证实了分析的正确性.据此,指出了该额外片段在植原体检测中的可能用途.

关键词：植原体、巢式PCR、额外片段、内部阳性对照

所属期刊栏目：35

分类号：Q939.34(微生物学)

资助基金：国家留学基金20003030

在线出版日期：2007-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：97-103