土壤中盾壳霉双标记平板计数法的建立及应用

摘要：

盾壳霉是一种重要的生防菌,其在土壤中的存活数量直接关系到防治病害的效果.然而目前没有对土壤中盾壳霉直接计数的方法,构建一种简单易行的土壤中盾壳霉计数方法对研究盾壳霉在土壤中的存活动态具有重要意义.本研究利用农杆菌转化法构建了潮霉素基因和绿色荧光蛋白基因标记的双标记盾壳霉菌株,并测定转化子的生长速度、产孢量和菌核致腐能力,初步分析了该方法计数土壤盾壳霉的有效性和可行性.结果显示,潮霉素基因和绿色荧光蛋白基因可以稳定地遗传和表达,并且部分转化子生长速度、产孢量和菌核致腐能力与出发盾壳霉菌株JN-CM没有显著差异.加入土壤中的盾壳霉转化子可以在含潮霉素(50μg/mL)、氯霉素(100μg/mL)和链霉素(100μg/mL)的PDA平板培养,杂菌得到充分抑制,呈现绿色荧光的盾壳霉转化子被有效检出,检出限达到2×103个/g土.本研究所构建的计数方法能有效检出施入土壤中的盾壳霉并进行活菌计数,可以用于盾壳霉JN-CM产品在土壤中的定殖、生长、繁殖和存活情况的研究.应用双标记平板计数法研究了不同温度、湿度、接种量和添加菌核等条件下盾壳霉JN-CM在土壤中的存活规律.结果显示,在含有核盘菌菌核的土壤中,盾壳霉JN-CM可以通过重寄生维持一段时间(12周)的数量增长,在长达半年左右(24周)的时间里其存活率仍然可以维持在65％左右.在不合菌核的土壤中,在一般土壤温度(10～20℃)范围内,无论土壤水分含量高低,其半年存活率也可以维持在50％左右.因此,可以预测,连续施用盾壳霉JN-CM生防制剂,可以使其数量在土壤中长期维持在一定的水平范围,达到长效防治效果.

关键词：生物防治、盾壳霉、农杆菌介导转化、平板计数

所属期刊栏目：43

分类号：S476(各种防治方法)

资助基金：2015江苏省重点研发计划现代农业重点项目BE2015309

在线出版日期：2017-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：134-142