八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因cDNA序列的克隆及原核表达研究

摘要：

[目的]克隆八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的cDNA序列并进行原核表达.[方法]以八字地老虎预蛹期幼虫为材料提取总RNA,利用RT-PCR和RACE技术克隆基因cDNA序列,将cDNA序列编码区连接到原核表达载体pET21b并转化BL21进行原核表达,并使用His-tag纯化试剂盒将目的蛋白进行纯化.[结果]得到cDNA全长序列,含有2 488个碱基,包括一个1 785个碱基的开放阅读框,编码一个含594个氨基酸的蛋白,分子量为67.8 ku,等电点5.38,该序列登录GenBank并获得登录号FJ848784.诱导表达蛋白经SDS-PAGE电泳得到目的蛋白带,纯化结果也获得了目的蛋白带.[结论]获得了一条新的八字地老虎β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶基因的cDNA序列并对其在原核表达系统中进行了成功表达和纯化.

关键词：八字地老虎、β-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶、克隆、原核表达、纯化

所属期刊栏目：37

分类号：Q523;Q969.436(核酸)

资助基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目11521020

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：50-55