HBx缺失突变体介导RhoGDIα表达下调对肝癌细胞迁移和侵袭的影响

摘要：

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)缺失突变体(HBxΔ31)抑制Rho蛋白二磷酸鸟苷解离抑制因子α(RhoGDIα)表达的作用机制及其对肝细胞癌(HCC)转移的影响.方法 选取稳定表达野生型HBx及其缺失突变体HBxΔ31蛋白的HCC细胞株HepG2为研究对象,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白印迹法检测HBxΔ31对RhoGDIα表达的影响.构建RhoGDIα启动子区系列缺失报告基因载体,与真核表达载体HA-HBx及HA-HBxΔ31共转染HepG2细胞,荧光素酶活性检测确定HBxΔ31关键作用区域.免疫共沉淀(Co-IP)鉴定HBxΔ31与转录因子myc相关锌指蛋白(MAZ)间的相互作用,凝胶电泳迁移率实验(EMSA)分析HBxΔ31对MAZ与RhoGDIα启动子结合的影响.体外迁移和侵袭实验观察RhoGDIα对HBxΔ31介导HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 HBxΔ31在转录水平抑制了RhoGDIα基因的表达,其作用核心区位于其启动子的-460~-242bp区域,对该区域3个转录因子MAZ结合位点突变分析,证实MAZ参与HBxΔ31对RhoGDIα的表达调控.Co-IP提示HBxΔ31能与MAZ相互作用,EMSA分析显示MAZ通过与RhoGDIα启动子结合发挥作用,而HBxΔ31增强了这种效应.体外侵袭和迁移实验表明,对照组与RhoGDIα干扰组的HepG2细胞迁移数分别为(58±5)个和(98±7)个,侵袭细胞数分别为(55±6)个和(113±6)个,差异均有统计学意义(t=18.91和t=20.12,均P<0.01);而转染HBxΔ31的HepG2细胞迁移数[(115±6)个]和侵袭细胞数[(102±5)个]均多于共转染RhoGDIα与HBxΔ31的HepG2细胞迁移数[(40±4)个]和侵袭细胞数[(42±4)个](t=18.14和t=16.31,均P<0.001).结论 HBxΔ31通过与MAZ相互作用增强其与RhoGDIα启动子的结合,导致RhoGDIα表达下调,从而促进肝癌细胞的侵袭和迁移.

关键词：癌、肝细胞、序列缺失、肝炎病毒、乙型、鸟嘌呤核苷酸游离阻滞剂、肿瘤转移

所属期刊栏目：29

分类号：R73;R39

资助基金：广东省自然科学基金9151040701000037Natural Science Foundation of Guangdong Province 9151040701000037

在线出版日期：2017-11-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：577-583