环氧合酶2慢病毒载体及其高表达乳腺癌稳定株的构建和增殖能力研究

摘要：

目的 构建环氧合酶2(COX-2)慢病毒载体,并建立高表达COX-2乳腺癌细胞株MCF7,研究COX-2在乳腺癌细胞增殖中的作用.方法 利用COX-2 PCR全长引物和COX2的cDNA载体获得COX-2编码区全长PCR产物.经限制性内切酶BamH Ⅰ和Xhol Ⅰ切割PCR产物及慢病毒载体plvx-DsRed-Monomer-N 1,连接酶连接,转化,测序,进而获得慢病毒载体plvx-COX-2-DsRed.后经嘌呤霉素筛选,得到带有红色荧光标记的稳定高表达COX-2乳腺癌细胞系MCF7-plvx-COX-2-DsRed,并利用实时PCR和Western blot进行验证.利用平板克隆和Western blot对比高表达COX-2 MCF7细胞系与正常MCF7细胞系的增殖能力的差异.结果 利用PCR技术获得COX-2载体后,筛选获得稳定高表达COX-2乳腺癌细胞系MCF7-plvx-COX-2-DsRed.生长曲线检测示,第2天起MCF7-plvx-COX-2-DsRed细胞较MCF7及MCF7-plvx-DsRed-Monomer-N1细胞生长速度明显增快(P＜0.05),平板克隆实验亦得出一致结果.经过蛋白相对定量分析,MCF7-plvx-COX-2-DsRed细胞株较MCF7和MCF7-plvx-DsRed-Monomer-N1细胞株的c-myc的表达量多(P＜0.05),β-catenin表达量减少(P＜0.05).结论 成功构建慢病毒载体plvx-COX-2-DsRed和高表达COX-2乳腺癌细胞株,并在RNA和蛋白水平加以验证.COX-2可能通过上调c-myc的表达,增强MCF7细胞增殖能力.

关键词：环氧化酶、乳腺肿瘤、细胞株、慢病毒、细胞增殖

所属期刊栏目：27

分类号：R737.9;R392.11;Q78

在线出版日期：2015-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：658-663