microRNA-200c靶向抑制转录因子激活蛋白2α表达增强结肠癌细胞增殖能力的体外研究

摘要：

目的 探讨hsa-microRNA-200c对结肠癌细胞增殖能力影响的作用及相关机制.方法 利用生物信息学数据库筛选可能与转录因子激活蛋白2α (AP-2α)特异性结合的microRNA并合成其真核表达质粒与特异干扰序列.利用脂质体介导将质粒PEZX-miR-200c、PEZX-NC、pmir-GLO-AP-2 α3”UTR、pmir-GLO与干扰序列miR-67-inhibtor、miR-200c-inhibitor转染至结肠癌HCT-116、SW480、HEK-293T细胞中.用实时荧光定量PCR法、Westem blot法和免疫细胞化学染色法检测细胞中AP-2α表达情况,用CCK-8法检测细胞增殖情况,用PE标记流式细胞术检测细胞凋亡情况;用双荧光素酶活性检测法判断miR-200c与AP-2 α的相互作用.结果 转染miR-200c-inhibitor的SW480(anti-miR-200c/SW480组)细胞增殖能力低于转染miR-67-inhibitor组(anti-miR-67/SW480组),同时凋亡水平高于anti-miR-67/SW480组”(78±0.7)％比(66±1.1)％,P＜ 0.05”,anti-miR-200c/SW480组AP-2α蛋白表达量高于anti-miR-67/SW480组(0.49±0.01比0.09±0.08,P＜0.05).转染PEZX-miR-200c表达质粒组HCT-116细胞(PEZX-miR-200c/HCT-116组)增殖能力高于转染PEZX-NC组(PEZX-NC/HCT-116组),同时AP-2 α的mRNA和蛋白量均降低(0.67±0.07比0.51±0.09,P＜0.05).共转染PEZX-miR-200c与pmirGLO-AP-2 α-3” UTR质粒组(共转实验组)HEK-293T细胞相对荧光素酶活性值明显低于共转染PEZX-miR-200c与pmir-GLO-AP-2α-3” UTR-deleted组(共转对照组)HEK-293T细胞(0.51±0.09比0.98±0.04,P＜ 0.01).结论 结肠癌细胞中miR-200c通过抑制AP-2 α转录后水平的表达活性增强细胞体外增殖能力.

关键词：转录因子激活蛋白2α、microRNA-200c、结肠肿瘤

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资助基金：山西省自然科学基金2010011047-1、2011021035-1

在线出版日期：2015-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：222-227