HPV16E7-HSP70融合蛋白在大肠杆菌中表达及纯化

摘要：

[目的]在大肠杆菌中表达HPV16E7-HSP70融合蛋白并进行纯化和复性,为进一步研究HPV16E7-HSP70融合蛋白抗喉癌免疫活性奠定基础.[方法]用构建的原核表达质粒pET28a HPV16E7-HSP70转化大肠杆菌BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达；通过超声波裂解细菌,高浓度尿素裂解包涵体和Ni2+离子金属螯合亲和层析纯化目的蛋白；并对融合蛋白进行复性；用SDS-PAGE及Western Blot进行分析鉴定.[结果]SDS-PAGE 分析显示有分子量约为90kD的融合蛋白表达,表达产物以包涵体形式存在,表达量可达30％；纯化后目的蛋白的纯度达到95％；经Western Blot鉴定复性后的融合蛋白能与抗HPV 16E7抗体、抗HSP70抗体特异性结合.[结论]HPV16E7-HSP70融合蛋白能够在体外大肠杆菌中表达获得.

关键词：人乳头状瘤病毒、热休克蛋白、融合蛋白、包涵体、纯化、复性、大肠杆菌

所属期刊栏目：18

分类号：R730(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目3701610

在线出版日期：2013-01-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：660-664