抗CEA和CA19-9的单链抗体在HEK293细胞中的融合表达及亲和力鉴定

摘要：

目的 在HEK293细胞中高效表达抗CEA scFv和抗CA19-9 scFv两种单链抗体的Fc融合蛋白(anti-CEA scFv-Fc和anti-CA19-9 scFv-Fc),并测定两种单链抗体亲和力.方法 从GenBank中获取两种scFv基因序列;经优化后合成,并与pET32a(+)构成原核表达载体anti-CEA scFv/pET32a(+)和anti-CA1 9-9 scFv/pET32a(+),在E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达;两种scFv经PCR扩增技术删除末端终止序列,利用重叠区基因扩增法在anti-CEA scFv上游加入人IL-2信号肽,分别与含人IgG Fc段基因的pTT5载体(Fc/pTT5)构成真核表达载体(anti-CEA scFv(-t)-Fc/pTT5、IL2-anti-CEA scFv(-t)-Fc/pTT5和anti-CA19-9 scFv(-t)-Fc/pTT5);使用脂质体转染法,将3个重组质粒转入HEK293细胞中进行表达;产物经rProtein-A FF亲和层析纯化,竞争性细胞ELISA和Western blot检测.结果 免疫印迹显示,3个scFv-Fc融合蛋白均在HEK293细胞中表达;竞争结合实验表明,anti-CEA scFv-Fc和anti-CA19-9 scFv-Fc的抗体浓度分别为8.2 nmol/L和6.0 nmol/L.结论 anti-CEA scFv和anti-CAl9-9 scFv能在HEK293细胞内表达;虽然表达量较低,但纯化后表达产物能够识别肿瘤细胞表面抗原CEA和CA19-9.

关键词：癌胚抗原、CA19-9、单链抗体、亲和力

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分类号：R392.11

资助基金：常州市武进区科技局社会发展类科技支撑项目WS201606;常州市卫生计生委重大科技项目ZD201608;常州市高层次卫生人才培养工程2016CZBJ054;常州市科技支撑-社会发展项目CE20165051

在线出版日期：2019-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：7-13