miR-132在食管癌细胞系KYSE150中对靶基因FOXA1的调控作用

摘要：

目的 构建miR-132真核表达载体和融合靶基因FOXA1表达载体,在食管癌细胞KYSE150中验证miR-132对靶基因FOXA1的调控作用.方法 根据miR-132序列在基因组中的位置及其上下游序列,以EC9706细胞基因组DNA为模板,扩增包含miR-132前体序列,克隆到pMD18-T Simple中,经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后亚克隆到质粒pcDNA3.1(+)上；通过Real-time PCR检测转染重组表达载体pcDNA3.1-miR-132的KYSE150成熟miR-132的表达水平.用生物信息学软件对miR-132的靶基因进行预测,将候选靶基因FOXA1的3′UTR区融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-132对靶基因FOXA1的调控作用.将pCDNA3.1-miR-132表达质粒转染人食管癌细胞KYSE150,通过Western blot检测miR-132对FOXA1蛋白表达的影响.结果 成功构建了miR-132真核表达载体,Real-time PCR验证表明pCDNA3,1-miR-132在KYSE150细胞中能够显著地过表达成熟miR-132.生物信息学预测FOXA1可能是miR-132的靶基因.双荧光素酶报告基因分析表明miR-132能够作用于FOXA1的3′UTR.Western blot进一步证实miR-132能够抑制内源性FOXA1蛋白的表达.结论 FOXA1是miR- 132直接调控的靶基因.

关键词：KYSE150、miR-132、FOXA1

所属期刊栏目：38

分类号：R735.1(肿瘤学)

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1363-1366