一种新的重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-mAFP的构建

摘要：

目的 构建表达小鼠甲胎蛋白(murine alpha fetoprotein,mAFP)基因的重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-mAFP,并测定其滴度.方法 从Hepa1-6小鼠肝癌细胞中提取总RNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增mAFP基因,测序确认后,插入到pAdBM5-GFP穿梭载体中,双酶切鉴定重组腺病毒载体.线性化重组腺病毒载体与病毒骨架DNA质粒用磷酸钙共沉淀法共转染HEK293A细胞,通过同源重组使腺病毒表达mAFP基因,并在HEK293A细胞中大量扩增含目的基因的重组腺病毒,用TCID50法测定重组腺病毒滴度.结果 成功克隆了小鼠mAFP基因,构建出表达mAFP基因的重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-mAFP,获得了表达mAFP基因的重组腺病毒,病毒滴度达3.2×108PFU/ml.结论 本研究成功构建了pAdBM5-GFP-mAFP载体,获得了高滴度表达mAFP基因的重组腺病毒,为进一步开展肝癌的免疫基因治疗奠定了基础.

关键词：pAdBM5-GFP、小鼠甲胎蛋白、重组腺病毒载体

所属期刊栏目：34

分类号：R730.59(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30360114

在线出版日期：2007-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：274-276,318