大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶基因真核表达载体的构建及其在MKN-45细胞中的表达

摘要：

目的克隆大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(EPNP)基因并构建真核表达载体pcDNA3.1-EPNP,将重组质粒转染MKN-45细胞获得高表达大肠杆菌PNP基因的MKN-45细胞克隆.方法根据Genbank 中大肠杆菌PNP 基因的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,以大肠杆菌基因组DNA为模板,进行PCR扩增,并将扩增产物定向插入pMD-18T克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pcDNA3.1,利用脂质体将重组质粒转染MKN-45细胞.结果 PCR扩增出716bp 大小的片段,测序结果与已报道的EPNP基因序列一致;亚克隆经酶切鉴定正确; RT-PCR证明经G418筛选得到的转基因MKN-45细胞克隆中存在大量EPNP mRNA,前体药MePdR对转染EPNP的MKN-45细胞有较强的细胞毒作用.结论成功构建了大肠杆菌PNP基因的真核表达载体, 获得了稳定表达大肠杆菌PNP基因的MKN-45细胞克隆,为PNP/MepdR自杀基因系统在胃癌基因治疗中的应用奠定了良好的基础.

关键词：大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶、自杀基因、基因治疗

所属期刊栏目：33

分类号：R735.2(肿瘤学)

资助基金：吉林省科技厅科研项目20030424-02

在线出版日期：2006-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：239-242