玉屏风散对小鼠胸腺上皮细胞介导的皮肤T淋巴细胞功能的影响

摘要：

[目的]研究益气固表经典方玉屏风散(Yupingfeng Powder,YPF)对BALB/c小鼠胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TECs)介导的小鼠皮肤T淋巴细胞功能的影响.[方法](1)离体器官培养法研究YPF对BALB/c小鼠表皮淋巴细胞的影响及TECs在该过程中的作用.分离BALB/c小鼠皮肤组织和原代TECs细胞,设对照组(正常培养皮肤组织),YFP低、中、高剂量组(皮肤组织予25、50、100μg·mL-1 YPF处理)、TEC共培养组(TECs与皮肤组织共培养)、TEC+YPF低、中、高剂量组(TECs与皮肤组织共培养,同时分别加入25、50、100μg·mL-1 YPF处理),以上各组培养72h后以免疫组化法检测皮肤组织中CD3+、CD4+、CD8+T细胞的数量.(2)研究YPF对BALB/c小鼠胸腺细胞、脾细胞的影响及TECs在该过程中的作用.分离小鼠脾淋巴细胞和胸腺细胞,以噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法检测25、50、100μg·mL-1 YPF对脾淋巴细胞和胸腺细胞增殖的影响.再采用TECs分别与脾淋巴细胞或胸腺细胞共培养,以对照培养液或上述浓度YPF处理48h,流式细胞术检测脾淋巴细胞和胸腺细胞中CD3+、CD4+和CD8+T细胞数量及CD4+/CD8+细胞比值的变化,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测脾淋巴细胞和胸腺细胞中γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-2(interleukin-2,IL-2)和IL-4的表达水平.(3)研究YPF对BALB/c小鼠TEC增殖及功能的影响.25、50、100μg·mL-1 YPF直接干预TECs 48h,MTT法检测YPF对TECs增殖的影响,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测TECs中胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)、信号传导及转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-7、IL-12和IL-17 mRNA水平变化,ELISA检测TECs分泌IL-7的水平.[结果](1)与对照组比较,TECs与皮肤组织共培养后,皮肤中CD3+、CD4+和CD8+T细胞数量增加.YPF处理后增加更明显.(2)不同浓度YPF对脾淋巴细胞和胸腺细胞均有促增殖作用(P<0.01);与脾淋巴细胞、胸腺细胞单独培养组比较,脾淋巴细胞、胸腺细胞与TECs共培养,并采用不同剂量YPF处理后CD3+、CD4+、CD8+T细胞数均显著升高,其中脾淋巴细胞+TECs+高剂量YPF组和胸腺细胞+TECs+各剂量YPF组中CD4+/CD8+比值显著升高(P<0.05,P<0.01);ELISA结果显示,TECs与脾淋巴细胞或胸腺细胞共培养后,采用不同剂量YPF处理,IFN-γ水平均升高,YPF中、高剂量组IL-2水平升高(P<0.05).(3)不同浓度YPF处理能显著下调TECs中TSLP、STAT3、TNF-α、IL-12和IL-17mRNA水平,显著上调IL-7 mRNA水平(P<0.01),增加TECs分泌IL-7的水平(P<0.05,P<0.01).[结论]YPF可增强TECs介导的皮肤T细胞数量增殖,并刺激IFN-γ等细胞因子分泌.YPF还能够促进脾淋巴细胞和胸腺细胞的增殖,增强其功能,并促进T细胞向Th1细胞分化,其机制可能与YPF能促进TECs分泌IL-7有关.本研究提示,YPF具有潜在的促进胸腺介导的皮肤T淋巴细胞免疫功能的作用.

关键词：玉屏风散、胸腺上皮细胞、胸腺细胞、淋巴细胞、皮肤免疫功能、益气固表

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分类号：R331(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目;浙江省自然科学基金一般项目

在线出版日期：2020-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：941-948