知柏地黄汤通过调节ARE信号通路激活细胞抗氧化反应治疗阴虚火旺证的机制研究

摘要：

[目的]通过研究知柏地黄汤对细胞抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路的调节及其对大鼠血清代谢物的干预作用,探讨其治疗阴虚火旺证的可能机制.[方法]将人肝癌细胞系HepG2细胞分为对照组、知柏地黄汤低、中、高浓度组,分别以0、1、20和100mg·mL-1的知柏地黄汤干预24h,通过双萤光素酶报告基因实验筛选知柏地黄汤显著调控的信号通路;荧光定量PCR检测所筛选通路相关基因的表达,并利用磷钼酸比色法及氧化酶法检测细胞内三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量、细胞耗氧率(oxygen consumption rate,OCR)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性的变化.45只SD大鼠随机分成3组,空白组以0.9％氯化钠溶液灌胃21d,干姜组先以10g·kg-1干姜附子肉桂汤灌胃14d、再以0.9％氯化钠溶液灌胃7d,干知组先以10g·kg-1干姜附子肉桂汤灌胃14d、再以知柏地黄汤灌胃7d,灌胃体积为10mL/(kg·d),以液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)技术检测血清中代谢物的改变.[结果]双萤光素酶报告基因实验显示,知柏地黄汤对ARE元件调控最为显著,荧光定量PCR结果显示知柏地黄汤可以促进核因子红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、小肌腱膜纤维肉瘤(musculoaponeurotic fibrosarcoma,Maf)的转录(P<0.001,P<0.05),同时抑制Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)的转录(P<0.001).与对照组比较,知柏地黄汤组细胞ATP含量(P<0.05)、OCR(P<0.001)及SOD活性(P<0.05)均升高.动物实验证实,知柏地黄汤灌胃治疗可以改善阴虚火旺模型大鼠胆碱、甘胆酸及棕榈酰左旋肉碱(palmitoyl-L-carnitine,PALC)的紊乱,其中胆碱及PALC含量差异有统计学意义(P<0.001).[结论]知柏地黄汤能够通过ARE信号通路,抑制机体的氧化应激反应,进而改善阴虚火旺引起的代谢紊乱,这可能是知柏地黄汤治疗阴虚火旺证的作用机制之一.

关键词：知柏地黄汤、干姜附子肉桂汤、氧化应激、阴虚火旺证、ARE通路、代谢组学

所属期刊栏目：44

分类号：R331(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金项目;国家重点基础研究发展计划973计划项目

在线出版日期：2020-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：316-323