大鼠ATPase a3基因siRNA筛选及慢病毒载体构建

摘要：

[目的]设计、筛选大鼠破骨细胞(osteoclast,OC)骨吸收关键基因ATPase a3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)并构建其慢病毒表达载体,为研究以OC亢进的骨代谢疾病莫定基础.[方法]设计ATPase a3基因shRNA序列并合成小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)结构的DNA,退火形成双链DNA,与经Hpa I和Xho I酶切慢病毒pGCL-GFP载体连接,构建成携带ATPase a3-shRNA慢病毒质粒载体(pGCL-ATPase a3-shRNA),PCR及测序鉴定后,Western blot筛选出携带最佳siRNA的慢病毒质粒载体,并利用慢病毒包装质粒(pHelper 1.0和pHelper 2.0)将其制备成ATPase a3-shRNA慢病毒,并测定病毒滴度.[结果]成功构建出ATPase a3-shRNA慢病毒载体,Western blot筛选出携带最佳siRNA片段,并将其成功包装成5×108Tu.mL-1滴度的ATPase a3-shRNA慢病毒.[结论]成功构建大鼠ATPase a3基因RNAi慢病毒.

关键词：大鼠、ATPase a3基因、RNA干扰、慢病毒

所属期刊栏目：35

分类号：R331(人体生理学)

资助基金：国家自然基金资助项目30873276;浙江省自然科学基金资助重大项目Z303656

在线出版日期：2011-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：218-221,225