miRNA-4429靶向结合MCL1调控食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移与侵袭的机制研究

摘要：

目的 探讨miRNA-4429靶向结合髓样细胞白血病-1(MCL1)对食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响.方法 采用qRT-PCR法检测食管鳞状细胞癌细胞系和食管正常上皮细胞中miRNA-4429的相对表达量.采用脂质体转染法分别将miRNA-4429模拟物和模拟物对照转染至食管鳞状细胞癌EC9706细胞,分为实验组和对照组.应用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术和Transwell小室实验等探究miRNA-4429对食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响.构建MCL1的3'非编码区(3'UTR)野生型和突变型荧光素酶报告基因载体,应用荧光素酶报告基因实验验证MCL1是否为miRNA-4429的靶基因.采用Western blot法检测实验组和对照组MCL1蛋白的表达水平.结果 4株食管鳞状细胞癌细胞中miRNA-4429相对表达量均明显低于食管正常上皮细胞(均P<0.01);而与对照组比较,实验组细胞中miRNA-4429相对表达量显著上调(P<0.01).实验组细胞OD值在72、96 h均明显低于对照组(均P<0.01);与对照组比较,实验组细胞集落形成数明显降低(P<0.01).与对照组比较,实验组细胞凋亡率明显升高(P<0.01).实验组细胞迁移数及侵袭数均明显低于对照组(均P<0.01).miRWalk、miRDB和miRTarBase预测结果表明,MCL1是miRNA-4429的作用靶基因.荧光素酶报告基因实验的结果表明,共转染MCL13'UTR-野生型荧光素酶报告载体后,与对照组比较,实验组荧光素酶相对活性降低(P<0.05);而共转染MCL13'UTR-突变型荧光素酶报告载体后,实验组与对照组荧光素酶相对活性比较差异无统计学意义(P>0.05).实验组MCL1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.01).结论 食管鳞状细胞癌细胞株中miRNA-4429相对表达量降低,上调miRNA-4429表达可减弱食管鳞状细胞癌EC9706细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,其作用机制可能与靶向结合调控MCL1的表达有关.

关键词：食管鳞状细胞癌、miRNA-、4429、髓样细胞白血病-、1、增殖、迁移、侵袭、凋亡

所属期刊栏目：43

分类号：R735.2;Q78;R34

资助基金：金华市重点科研项目;金华市重点科研项目

在线出版日期：2021-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1164-1169,后插1