失巢环境下肿瘤源性外泌体调控结肠癌细胞的增殖和凋亡相关机制研究

摘要：

目的 探讨失巢环境下肿瘤源性外泌体调控结肠癌细胞增殖和凋亡的相关机制.方法 采用低黏附细胞培养板将结肠癌细胞系SW480培养建立结肠癌抗失巢凋亡细胞株.采用超速离心法收集抗失巢凋亡细胞和常规结肠癌细胞的外泌体,利用透射电镜观察外泌体的形态,采用Western blot法检测外泌体标志物CD63和CD81的表达.采用CCK-8试剂盒、Edu试剂盒和AV-PI试剂盒检测在两种细胞源性外泌体的刺激下结肠癌细胞的增殖和凋亡能力.采用RT-PCR和Western blot法检测细胞外信号调节激酶5(ERK5)、凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(Bad)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA和蛋白的表达水平.结果 透射电镜观察结果显示,外泌体为直径50～150 nm的双层膜囊泡状结构.Western blot结果显示,外泌体的分子标志物CD81和CD63表达阳性.失巢环境下提取的外泌体与结肠癌细胞共培养的过程中,可见结肠癌细胞可以摄取并内化PKH67标记的外泌体.抗失巢凋亡结肠癌细胞的细胞凝集能力要明显高于常规结肠癌细胞,差异有统计学意义(P<0.05).CCK-8和Edu染色结果显示,抗失巢凋亡结肠癌细胞外泌体与结肠癌细胞共培养后细胞的增殖能力要明显高于常规结肠癌细胞组(P<0.05).RT-PCR和Western blot等结果显示,抗失巢凋亡结肠癌细胞组的ERK5、Caspase-3和Bad的表达水平均明显低于常规结肠癌组(均P<0.05),而Bcl-2高于常规结肠癌组(P<0.05).AV-PI试剂盒检测结果显示,抗失巢凋亡结肠癌细胞外泌体组细胞凋亡率明显低于常规结肠癌外泌体组(P<0.05).结论 抗失巢凋亡结肠癌细胞外泌体可以通过ERK5信号通路促进细胞的增殖,抑制细胞的凋亡.

关键词：抗失巢凋亡、外泌体、结肠癌、增殖、凋亡

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分类号：R735.7;R394.2;R285.5

资助基金：金华市公益类项目2019-4-002

在线出版日期：2021-06-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1050-1055,后插1-后插2