miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株PIK3R1基因靶向调控作用的研究

摘要：

目的 探讨miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株磷脂酰肌醇三激酶调节亚单位α(PIK3R1)基因靶向调控的作用.方法 培养HT-29细胞并用脂质体转染试剂进行转染,利用实时定量逆转录-聚合酶链反应、免疫印迹试验分别检测miRNA-455-5p上下调后PIK3R1及PI3K/AKT信号通路的PI3K下游效应分子(AKT1、MTOR)的基因及蛋白相对表达量.构建PIK3R1的3′非编码区(3′UTR)报告载体,利用双荧光素酶报告基因实验验证PIK3R1基因是否为miRNA-455-5p靶基因.结果 与模拟剂对照组比较,上调miRNA-455-5p能抑制HT-29细胞中PIK3R1、AKT1、MTOR mRNA及蛋白的表达(均P<0.05);与抑制剂对照组比较,抑制miRNA-455-5p能促进HT-29细胞中PIK3R1、AKT1、MTOR mRNA及蛋白的表达(均P<0.05).双荧光素酶报告基因实验可获得测序验证正确的PIK3R1的3′UTR报告载体.hsa-miRNA-455-5p与psicheck3-gluc-_PIK3R1-3′UTR-WT_-fluc共转染293细胞48h后检测得到的分泌型荧光素酶/非分泌型荧光素酶(Gluc/Fluc)值较mimics-N与psicheck3-gluc-_PIK3R1-3′UTR-WT_-fluc共转染48h后得到的值明显降低(P<0.05).结论 miRNA- 455- 5p对人结肠癌HT- 29细胞株PIK3R1基因存在负向调控作用,PIK3R1基因是miRNA- 455- 5p调控的靶基因.

关键词：结直肠癌、逆转录、靶基因、生物学特性

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资助基金：宁波市科技计划项目2019A610330

在线出版日期：2020-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：650-655,659