shRNA干扰TTF-1基因对肺腺癌细胞EGFR-TKI敏感性及细胞上皮间质化的影响

摘要：

目的 探讨甲状腺转录因子(TTF-1)对肺腺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)药物敏感性及细胞上皮间质化的影响.方法 将培养后的肺腺癌HCC827细胞分为空载体组、阴性质粒转染(NC-shRNA)组和阳性质粒转染(TTF-1-shRNA)组,通过shRNA干扰技术抑制细胞中的TTF-1基因表达,用流式细胞仪测定转染前后细胞凋亡率和细胞周期变化.不同浓度的吉非替尼(10、20、40、60μmol/ml)作用各组细胞72h,CCK-8法检测细胞生长抑制率.5ng/ml转化生长因子-β1(TGF-β1)作用各组细胞48h,细胞出现上皮间质化,Western blot法测定TTF-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达.结果 与NC-shRNA组、空载体组比较,TTF-1-shRNA组细胞凋亡率明显增加,G0/G1相百分比升高,S相和G2/M相百分比降低(均P<0.05);不同浓度吉非替尼作用后,每组细胞的生长抑制率均随药物浓度的增加而升高,不同浓度比较差异有统计学意义(P<0.05).同一浓度时,3组细胞生长抑制率之间的差异有统计学意义(P<0.05);TTF-1-shRNA组较NC-shRNA组、空载体组均明显为高,差异均有统计学意义(均P<0.05);而空载体组与NC-shRNA组比较,仅在吉非替尼20μmol/ml差异有统计学意义(P<0.05).TGF-β1作用前后,与空载体组和NC-shRNA组比较,TTF-1-shRNA组细胞TTF-1、α-SMA蛋白表达水平均为低,E-cadherin蛋白表达水平均为高,差异均有统计学意义(均P<0.05).与TGF-β1作用前比较,TGF-β1作用后NC-shRNA组和空载体组TTF-1蛋白表达水平均下降,E-cadherin蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05).与NC-shRNA组、空载体组比较,TTF-1-shRNA组TGF-β1作用前后细胞E-cadherin、α-SMA蛋白变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05).结论 shRNA干扰TTF-1基因可增加肺腺癌HCC827细胞对EGFR-TKI药物敏感性,并部分抑制细胞上皮间质化.

关键词：肺腺癌、TTF-1、上皮间质化、EGFR-TKI、HCC827

所属期刊栏目：41

资助基金：浙江省自然科学基金LQ16H270005;浙江省中医药管理局科研基金2015ZB042

在线出版日期：2019-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2374-2378,前插2