小窝蛋白-1重组慢病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建小窝蛋白-1(Cav-1)重组慢病毒载体,并在293T细胞和小鼠中验证Cav-1过表达.方法 将Cav-1基因克隆至慢病毒载体GV287,然后利用酶切、PCR扩增鉴定、阳性克隆鉴定及测序验证构建Cav-1重组慢病毒.将Cav-1重组慢病毒转染至293T细胞,通过荧光检测慢病毒转染效果,采用Western blot法检测Cav-1蛋白表达情况,同时转染C57BL6小鼠,免疫组化法检测小鼠肺组织中Cav-1的表达情况.结果 经酶切、PCR扩增鉴定以及阳性克隆测序,提示Cav-1重组慢病毒构建正确.荧光检测显示转染Cav-1重组慢病毒后的293T细胞可见强荧光,Western blot法检测结果显示目的基因可表达,小鼠肺组织中Cav-1呈强阳性表达,且实时定量PCR检测Cav-1重组慢病毒滴度为1.3×1012copies/ml,达到可利用标准.结论 采用本研究方法可成功构建Cav-1重组慢病毒载体.

关键词：小窝蛋白-1、重组慢病毒载体、急性肺损伤

所属期刊栏目：41

资助基金：浙江省公益技术应用研究计划项目2016C37125

在线出版日期：2019-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1477-1479,1485