miR-34b促进关节软骨细胞基质退变的分子机制研究

摘要：

目的 探讨微小RNA-34b(miR-34b)促进关节软骨细胞基质退变的分子机制.方法 提取10例骨关节炎(OA)患者和7例创伤性截肢者的膝关节软骨组织,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测组织标本中miR-34b表达水平.利用Targetscan基因信息软件预测得到miR-34b靶基因为Smad3,构建Smad3野生型及突变型3'非编码区(3'-UTR)-荧光素酶报告载体,利用荧光素酶报告基因实验检测miR-34b对Smad3基因野生型及突变型3'-UTR荧光素酶活性的影响.体外培养SW 1353细胞,分为A、B、C和D组,分别加入等量脂质体、无义序列、miR-34b模拟物(miR-34b mimic)和miR-34b抑制物(miR-34b inhibitor).RT-qPCR法检测miR-34b、Smad3、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达水平.结果 OA软骨组织中miR-34b表达水平较正常膝关节软骨组织明显上调(P＜0.05).SW 1353细胞转染后,与A组比较,C组miR-34b表达水平明显升高(P＜0.05),D组明显降低(P＜0.05);A组与B组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Targets Can软件预测miR-34b的潜在靶基因为Smad3,荧光素酶报告基因实验证实miR-34b直接靶向抑制靶基因Smad3;转染miR-34b mimic和miR-34inhibitor后,与A组比较,C组Smad3 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05),D组明显升高(P＜0.05);A组与B组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).转染后,与A组比较,C组Ⅱ型胶原mRNA表达水平明显降低(P＜0.05),D组明显升高(P＜0.05);C组MMP-13mRNA明显升高(P＜0.05),D组明显降低(P＜0.05).结论 miR-34b可能通过抑制其靶基因Smad3的表达进而诱导人关节软骨细胞基质退变,从而促进OA的发生、发展.

关键词：微小RNA-34b、Smad3、骨关节炎、软骨细胞基质

所属期刊栏目：40

资助基金：嘉兴市科技局计划项目2013AY21058

在线出版日期：2018-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：339-341,364