利用退火反应产生粘性末端的基因克隆新方法

摘要：

目的 通过引物设计和退火反应产生内切酶的粘性末端,旨在开发一种高效、简单、可靠的分子克隆方法.方法 选定限制性内切酶(平末端或者粘性末端)设计3条或4条引物,同时进行两次独立的聚合酶链式反应(PCR),随后把两次PCR产物回收后混在一起经过解链退火,再将其与双酶切的载体质粒进行连接反应,最后转化即可得到目的克隆. 结果 利用此方法成功一次性将若干靶基因(P90rsk、Nprl2、Mios、Ragc、S6k、Pkca)构建在经EcoRV和Notl双酶切后的pcDNA3.1(+)载体上,经酶切及测序验证. 结论 该方法无需考虑靶基因内部是否存在酶切位点,可省去PCR产物酶切及之后的纯化回收过程,可快速并准确地克隆目标基因.

关键词：分子克隆、聚合酶链反应、退火、限制性酶切位点、粘性末端

所属期刊栏目：39

分类号：S96;TG8

资助基金：浙江省自然科学基金资助项目LZ17H250001

在线出版日期：2017-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1166-1169,后插2