慢病毒介导的hGM- CSF修饰的肿瘤疫苗免疫活性研究
目的：构建编码人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（human granulocyte- macrophage colony stimulating factor， hGM- CSF）的慢病毒载体，研究编码hGM- CSF的慢病毒载体对树突状细胞（dendritic cel ，DC）疫苗抗肿瘤活性的增强作用。方法以质粒 pORFhGM- CSF为模板，采用 PCR 方法扩增出hGM- CSF基因片段；通过 BamHⅠ和XhoⅠ限制性内切酶位点，将hGM- CSF基因定向克隆到慢病毒连接载体L166中构建重组载体L166- hGM- CSF。将重组载体L166- hGM- CSF和包装载体L205以及包膜载体 L311共同转染慢病毒包装细胞293T，72h 后收集病毒上清液获得编码 hGM- CSF的慢病毒颗粒 Lenti-hGM- CSF。从脐血中分离出单核细胞，rhGM- CSF、rhIL-4和α- TNF诱导获得DC，通过相差显微镜和流式细胞仪鉴定。应用反复冻融法制备可溶性肿瘤抗原，分别将负载肿瘤抗原的DC疫苗和慢病毒Lenti- hGM- CSF感染的负载肿瘤抗原的DC疫苗与T淋巴细胞共同培养，MTT 方法检测并比较两者所诱导的 CTL对反应细胞的体外杀伤活性。结果编码 hGM- CSF的慢病毒载体L166- hGM- CSF成功构建，获得了编码hGM- CSF的慢病毒。该慢病毒的Hela细胞上清液中hGM- CSF的表达明显高于未感染者。从脐血中分离出的DC，显示其高表达CD80（87.2%）和CD86（92.8%），而单核细胞标志CD14的表达率较低（3.56%）。慢病毒介导的分泌hGM- CSF的树突状细胞肿瘤疫苗刺激同种T淋巴细胞增殖的能力和抗肿瘤活性较普通DC疫苗明显增强（P＜0.01）。结论本实验制备的慢病毒Lenti- hGM- CSF感染反应细胞后能够显著增强DC肿瘤疫苗刺激同种T淋巴细胞增殖的能力及其诱导的CTL细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，为hGM- CSF修饰的DC肿瘤疫苗的临床应用提供了一定的实验依据。
慢病毒载体、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、树突状细胞、肿瘤疫苗
R73;S85
山东省科技发展计划项目2004GG3202003
2013-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
1967-1971
