聚苯丙赖氨酸真核表达质粒的构建及其表达

摘要：

目的制备膜表达聚苯丙赖氨酸蛋白瘤苗并研究其抗肿瘤治疗作用.方法人工合成表达聚苯丙赖氨酸的DNA片断,扩增成带酶切位点的目的基因.选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点BglⅡ、PstⅠ之间.DNA测序证实后,以脂质体转染的方法转染到鼠CT26细胞.采用G418抗性筛选并扩增阳性克隆,化疗药处理后采用化学偶连两步法使跨膜型多聚苯丙赖氨酸与肠癌细胞膜共价偶连,构建成新型瘤苗,观察瘤苗体外免疫效应.结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确,目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列.RT-PCR产物电泳、流式细胞术、激光共聚焦显微镜证实聚苯丙赖氨酸表达在转染的鼠CT26细胞膜上,体外免疫学实验显示瘤苗细胞体外对淋巴细胞增殖刺激效应显示有较强的淋巴增殖效应,产生的多克隆抗体对CT26肠癌细胞有特异性杀伤作用.结论聚苯丙赖氨酸跨膜修饰的瘤苗能够产生特异、较强的免疫效应.

关键词：膜表达、聚苯丙赖氨酸、跨膜、载体构建、瘤苗

在线出版日期：2012-11-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1479-1482