抑制HBV复制的小干扰RNA的重组腺病毒构建与鉴定

摘要：

目的 构建可同时表达绿荧光蛋白(GFP)和针对HBV S区基因的小干扰RNA(siRNA)的重组腺病毒,并研究该siRNA在体外对HBV的抑制作用.方法 采用PCR技术自质粒pEGFP-C1中扩增含CMV启动子的GFP表达框,自质粒pAVU6+4sh579中扩增含U6启动子的针对HBV S区579-597位基因的siRNA表达框,分别将两个表达框克隆至穿梭载体质粒pShuttle内,与质粒pADEasy-1在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组,将阳性重组体DNA转染至人胚肾细胞株HEK293细胞中进行包装、扩增,并在HepG2.2.15细胞中初步观察其对HBV复制的抑制疗效.结果 构建了可同时表达GFP和siRNA的重组腺病毒.其可在HEK293细胞中进行包装、扩增,并在HepG2.2.15细胞中对HBV-DNA、HBsAg和HBeAg的表达具有抑制作用.结论 成功构建了可同时表达GFP和针对HBV的siRNA的重组腺病毒,并在体外实验中证实了其对HBV复制具有抑制作用.

关键词：HBV、腺病毒载体、RNA干扰

所属期刊栏目：31

分类号：R73;TM7

资助基金：国家自然科学基金资助项目30371270;浙江省科技厅重大项目2003C13015

在线出版日期：2009-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1064-1066,1078