古尔图病毒核蛋白的原核表达纯化及ELISA检测方法的建立

摘要：

目的:获得纯化的GTV-rNP蛋白抗原，并建立快速准确检测GTV抗体的ELISA法。方法:人工合成密码子优化的 GTV-NP 编码基因，克隆至 pET32a（+）载体，构建重组表达质粒，转化至 BL21（DE3）。将优化表达获得的蛋白经Ni柱纯化后用SDS-PAGE和Western blot鉴定。以纯化蛋白为抗原，建立并优化GTV IgG抗体间接ELISA检测方法，并对其进行评价和初步应用。结果:成功构建原核表达质粒pET32a-NP，重组蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达，大小约为44 kD，Western blot结果表明重组蛋白与GTV阳性血清具有良好的抗原性。建立的ELISA法特异性强、敏感性高、批内和批间的变异系数均小于10%具有较好的重复性；检测结果与IFA检测结果符合率达到92.77%。结论:建立的GTV NP 抗体检测ELISA方法的敏感性、重复性和特异性均较好。

关键词：核蛋白类、酶联免疫吸附测定、血清学试验、表达纯化、古尔图病毒

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资助基金：国家自然科学基金81760365，81690369;新疆高校科研计划自然科学重点项目XJEDU2019I002;新疆维吾尔自治区大学生创新训练项目XJSRT-2020055;National Science Foundation of China81760365, 81960369;Natural Science Key Project of Xinjiang Colleges Scientific Research ProgramXJEDU2019I002;National undergraduate training program for innovation and entrepreneurship of XinjiangXJSRT-2020055

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：824-830