基于颜色判定的环介导逆转录等温扩增技术检测柯萨奇病毒A6型

摘要：

目的 建立基于羟基萘酚蓝(hydroxy naphthol blue, HNB)颜色变化的简单、灵敏和快速的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)检测方法,应用于柯萨奇病毒A6型(coxsackievirus A6,CV-A6)的检测.方法 针对CV-A6的VP1基因设计6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行50 min扩增反应.扩增前在反应体系中加入HNB,通过观察颜色变化进行检测结果判定.使用多种肠道病毒进行特异性验证,使用梯度稀释的体外转录CV-A6全VP1基因RNA进行灵敏度分析,同时与实时荧光定量逆转录PCR(rRT-PCR)检测结果进行比较,并对92份手足口病患者临床标本进行检测.结果 本研究建立的RT-LAMP方法对除CV-A6外的23种肠道病毒的检测结果均为阴性,灵敏度为100拷贝/反应,与rRT-PCR方法相当.在对92份手足口病临床标本的检测中,检测结果与rRT-PCR方法相符,Kappa值为1,灵敏度和特异性均为100％.结论 本研究建立的针对CV-A6的LAMP检测方法,特异度高,灵敏度与rRT-PCR相当,有望应用于CV-A6感染的快速筛选,具有在基层医疗卫生机构和现场推广与应用的潜力.

关键词：聚合酶链反应、柯萨奇病毒感染、环介导逆转录等温扩增

所属期刊栏目：49

分类号：S854.43;R373.2;R735.7

资助基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项;艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项;艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项;艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项

在线出版日期：2015-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1011-1015