酰胺类局麻药对脂肪来源间充质干细胞成软骨能力的影响

摘要：

目的 探讨不同种类酰胺类局麻药对脂肪起源间充质干细胞成软骨能力影响.方法 分离培养四月龄新西兰大白兔脂肪起源干细胞(ADMSCs)并向软骨方向诱导分化.取贴壁生长的第三代软骨方向分化ADMSCs,分别用磷酸缓冲液(对照组)、1％利多卡因(1％利多卡因实验组)、2％甲哌卡因(2％甲哌卡因实验组)、0.5％布匹卡因(0.5％布匹卡因实验组)和0.5％罗哌卡因(0.5％罗哌卡因实验组)浸泡30 min、60 min.5组在各时间点处理完成后,洗去局麻药,重新加入软骨方向诱导分化培养液,分别于培养第3天和第7天后采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并行番红-固绿染色评估软骨分化形态学变化,筛选出毒性最小的局麻药.将筛选出的毒性最小的一种局麻药稀释至25％,50％,75％,100％的浓度分别与软骨分化方向ADMSCs接触30 min和60 min,然后洗去局麻药重新加入软骨方向诱导分化培养液,在培养第3天和第7天后采用实时荧光定量(qPCR)和Western blot法检测软骨分化相关基因collagen Ⅰ、collagenⅢ、SOX9的表达,明确其对ADMSCs成软骨能力的影响.结果 软骨方向分化的ADMSCs与对应的局麻药物接触后,1％利多卡因实验组、2％甲哌卡因实验组、0.5％布匹卡因实验组和0.5％罗哌卡因实验组软骨方向分化的ADMSCs凋亡率较对照组均显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).软骨分化方向ADMSCs与以上4个实验组接触60 min后的细胞凋亡率均高于组内接触30 min后,差异均有统计学意义(P＜0.05);4个实验组培养第3天后的细胞凋亡率高于组内培养第7天后,差异均有统计学意义(P＜0 05).1％利多卡因处理组的细胞凋亡率低于2％甲哌卡因实验组、0.5％布匹卡因实验组和0.5％罗哌卡因实验组,差异均有统计学意义(P＜0.05).进一步研究显示,与不同浓度利多卡因接触后,collagen Ⅰ、collagenⅢ、SOX9的mRNA和蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05),且随着利多卡因浓度和接触时间的增加,其表达量的降低更为显著,细胞成软骨受到的影响也更大.结论 酰胺类局部麻醉药可抑制ADMSCs的软骨分化能力,且呈现时间-浓度依赖性.在等效工作浓度的酰胺类局麻药中,1％的利多卡因对ADMSCs的软骨分化能力影响较其他酰胺类局麻药小.

关键词：干细胞、局麻药、细胞毒性、再生医学

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资助基金：浙江省自然科学基金2016年面上项目LY16H170001Natural Science Foundation of Zhejiang Province grant LY16H170001

在线出版日期：2019-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：246-251