一种改良的小鼠胰岛分离方法

摘要：

目的 探讨一种简单快捷、廉价高效的小鼠胰岛分离与纯化方法.方法 采用自制的穿刺针由胆总管逆行穿刺并灌注胶原酶Ⅴ消化胰腺,使用仅一种密度梯度介质离心结合手工挑选的方法分离纯化6~8周龄雄性ICR小鼠胰岛.同时,以单纯手工挑选法纯化胰岛作为对照组.双硫腙染色鉴定获取胰岛纯度,吖啶橙/碘化丙啶染色鉴定胰岛活力.采用不同浓度葡萄糖(低糖2.8 mmol/L,高糖20.0 mmol/L)刺激的胰岛素释放实验检测胰岛功能.采用t检验比较两组间的差异.结果 采用自制穿刺针及密度梯度离心的新方法提取5只小鼠胰岛整体耗时152 min,而单纯手工挑选法则耗时347 min;新方法每只小鼠平均可得胰岛(95±8)个,略低于单纯手工挑选组的(124±10)个(t=4.027,P=0.016);但新方法所得胰岛纯度为92.6%±1.3%,显著高于单纯手工挑选法79.2%±5.5%(t=4.075,P=0.015).同时新方法所提取的胰岛活力与手工挑选法获得的胰岛的活力相当.新方法获得的胰岛在低糖和高糖刺激下上清中胰岛素分泌量分别为(66±13)和(256±46)μg/L(t=7.042,P=0.002),提示这种新方法获取的胰岛对糖的反应很灵敏.结论 采用自制的穿刺针及密度梯度离心的方法所得胰岛产量、纯度、活力及胰岛功能都相对良好,是一种简单快捷、廉价高效的小鼠胰岛分离方法.

关键词：糖尿病、胰岛、小鼠、分离纯化

所属期刊栏目：9

分类号：R33;P73

资助基金：国家自然科学基金81370874National Natural Science Foundation of China 81370874

在线出版日期：2017-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：561-566