泛素-核糖体融合蛋白52基因沉默对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞转化生长因子β1/Smad信号通路的影响

摘要：

目的 探讨RNA干扰(RNAi)介导泛素-核糖体融合蛋白52(UBA52)基因沉默对高糖环境下鼠肾小管上皮细胞NRK-52E转分化信号通路转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad的影响.方法 首先根据培养基葡萄糖浓度将NRK-52E细胞分为4组:正常对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.6 mmol/L葡萄糖+24.4 mmol/L甘露醇)、葡萄糖中浓度组(20 mmol/L葡萄糖)、葡萄糖高浓度组(30 mmol/L葡萄糖)并分别干预48 h,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测并比较各组UBA52、Smad7、TGF-β1水平,观察葡萄糖浓度对上述指标的表达影响.然后采用三个不同基因序列的UBA52小干扰RNA(UBA52 siRNA)分别转染NRK-52E细胞,通过荧光定量PCR筛选出最佳转染效果的UBA52 siRNA基因序列,并确定最佳转染时间及转染剂量.然后将NRK-52E细胞分为3组:空白对照组(30 mmol/L葡萄糖)、阴性对照组(30 mmol/L葡萄糖+无关RNA转染组)及转染组(30 mmol/L葡萄糖+UBA52 siRNA转染).48 h后实时荧光定量PCR法分别检测各组UBA52、TGF-β1、Smad7的mRNA表达变化,Western blotting法检测TGF-β1、Smad2/3、Smad7的蛋白表达.通过随机区组方差分析对上述指标进行统计学分析.结果 葡萄糖干预实验中正常对照组、高渗对照组、葡萄糖中浓度组、葡萄糖高浓度组肾小管上皮细胞UBA52、TGF-β1、Smad7 mRNA的表达量差异均有统计学意义(F=60.914、65.112、29.390,均P<0.05);葡萄糖中浓度组及高浓度组的UBA52、TGF-β1表达均明显高于正常对照组及高渗对照组,而Smad7的表达则明显低于正常对照组及高渗对照组.转染实验中空白对照组、阴性对照组及转染组TGF-β1 mRNA表达量分别为1.00±0.04、0.98±0.04、0.49±0.14,差异有统计学意义(F=26.364,P<0.001),转染组明显低于其他2组;3组Smad7 mRNA表达量分别为1.00±0.12、1.05±0.17、2.24±0.31,差异有统计学意义(F=22.816,P<0.001),转染组明显高于其他2组.3组TGF-β1蛋白表达量分别为0.676±0.357、0.613±0.011、0.184±0.073,差异有统计学意义(F=96.433,P<0.01),转染组表达量最低;Smad2/3的蛋白表达量分别为0.68±0.10、0.63±0.05、0.27±0.15,差异有统计学意义(F=12.194,P<0.05),转染组明显低于其他2组;Smad7的蛋白表达量分别为0.52±0.05、0.55±0.12、0.83±0.06,3组差异有统计学意义(F=12.154,P<0.05),转染组表达量最高.结论 干预高糖环境下鼠肾小管上皮细胞转分化信号通路TGF-β/Smad可能成为糖尿病肾病肾间质纤维化新的干预靶点.

关键词：泛素-核糖体融合蛋白52、基因沉默、转化生长因子β1

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分类号：R5 ;R69

资助基金：新疆维吾尔自治区自然科学基金项目2014211C127Natural Science Foundation of Xinjiang Uygur Autonomous Region2014211C127

在线出版日期：2017-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：304-309