一磷酸腺苷活化蛋白激酶调控的自噬作用可恢复糖尿病心肌对缺血后处理的敏感性

摘要：

目的：评价一磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)调控的自噬在恢复糖尿病缺血再灌注损伤心肌对缺血后处理（IPO）敏感性中的作用。方法取健康雄性SD大鼠(体重220～250 g)30只，随机数字表法分为假手术组(N+S组)、缺血再灌注组(N+IR组)、缺血后处理组(N+IPO组)；糖尿病大鼠模型采用腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg制备，取糖尿病诱导成功大鼠54只，随机数字表法分为糖尿病假手术组(D+S组)、糖尿病缺血再灌组(D+IR组)、糖尿病缺血后处理组(D+IPO)、AMPK激动剂A-769662干预的糖尿病缺血再灌注组(D+IR+A组)和A-769662干预的糖尿病缺血后处理组(D+IPO+A组)。其中N+S组与D+S组各6只，其余组各12只。缺血再灌注模型采用结扎左冠状动脉前降支30 min/开放120 min的方法建立；假手术只穿线，不结扎血管；缺血后处理组于再灌注前行3个循环的再灌注10 s/缺血10 s；A-769662于缺血前30 min腹腔注射6 mg/kg。再灌注结束后，氯化三苯基四氮唑染色测定心肌梗死面积(IS)，检测血清肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平，电镜观察自噬小体数量，Western blotting法检测心肌组织磷酸化AMPK蛋白(p-AMPK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的水平，微管相关蛋白轻链3B/A(LC3B/A)的比值，泛素结合蛋白p62的表达。多组间数据比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验。结果与非糖尿病大鼠相比，糖尿病大鼠体重减轻，血糖升高，心肌p-mTOR和p62明显上调，p-AMPK、自噬体数量和LC3B/A比值显著下降(t=4.15～34.65，均P<0.05)。与N+IR组相比，D+IR组IS、CK-MB、LDH显著增高(t=3.55、4.70、7.20，均P<0.05)；与N+S组相比，N+IR组p-AMPK，自噬体数量和LC3B/A比值显著上升，p-mTOR和p62表达显著下调(t=6.56、5.51、3.76、3.59、2.98，均P<0.05)，D+S组与D+IR组比较上述指标变化无明显差异。与D+IR相比，D+IPO+A组IS(28%±5%比45%±6%)、CK-MB[(1047±178)比(2050±325)U/L]、LDH[(1303±365)比(2558±189)U/L]、p-mTOR(0.48±0.24比1.29±0.25)和p62(0.74±0.12比1.04±0.24)明显下降， p-AMPK(1.81±0.19比0.61±0.15)、自噬体数量[(9.3±1.4)比(3.8±0.9)个]和LC3B/A比值(1.43±0.23比0.65±0.13)显著增加(t=5.26～11.82，均P<0.05)。结论 A-769662通过激活AMPK/mTOR通路增强心肌自噬，从而恢复糖尿病缺血再灌注心肌对IPO的敏感性。

关键词：糖尿病、1型、一磷酸腺苷活化蛋白激酶、自噬、心肌缺血再灌注损伤、缺血后处理

所属期刊栏目：8

分类号：R65;R69

资助基金：国家自然科学基金项目81471844Fund programNational Natural Science Foundation of China81471844

在线出版日期：2017-02-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：751-757