新生期小鼠胰岛细胞自噬及其机制研究

摘要：

目的：观察新生期小鼠胰岛细胞自噬的变化，分析自噬相关基因的表达差异并初步探讨相关调控机制。方法采用胶原酶消化法分离纯化第1、3和8周小鼠胰岛细胞，透射电镜观察自噬体显微结构。采用免疫荧光双染法检测胰岛中微管相关蛋白1轻链3（LC3）与胰岛素双阳性细胞比例的变化。采用实时定量PCR技术检测自噬相关基因（Atg）mRNA水平的表达。采用Western blotting法检测目的蛋白的表达。多组间数据比较采用单因素方差分析。结果（1）透射电镜结果显示，3周小鼠胰岛细胞出现内含胞浆或细胞器成分的具有双层膜结构的自噬体。免疫荧光结果显示，LC3在3周小鼠胰岛β细胞胞浆中着色较深，表达高于1周和8周（57.6±2.3比24.4±1.3、28.1±2.3，t=-21.44、-15.66，均P<0.01）。（2）3周时，p53 mRNA表达明显高于1周和8周，而哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA表达显著低于1周和8周（均P<0.01）。新生期小鼠胰岛细胞Atg的表达呈动态变化。与1周和8周相比，3周时Atg1激酶同源蛋白(ULK-1)、Beclin1和Map1lc3b表达明显增高（P<0.05）。与1周相比，3周时PI3Kc3、Atg5、Map1lc3a和Atg16l1表达显著增高（P<0.05）；3周和8周时Atg4d的表达显著增高（P<0.05）。Atg4c表达在3周时明显高于8周（P<0.05）。（3）Western blotting显示，与1、8周相比，3周时p53、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（pAMPK）、Beclin1和LC3-II蛋白表达均显著增高（F=29.14~56.05，均P<0.01），而mTOR蛋白表达明显低于1周和8周（0.61±0.06比1.00±0.02、0.89±0.09，F=29.41，P<0.01）。结论 p53/pAMPK/mTOR/Beclin1介导的自噬信号通路可能参与新生期小鼠胰岛细胞自噬的调控。

关键词：胰岛、自噬、基因、新生期小鼠

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分类号：R32;S43

资助基金：国家自然科学基金国际地区合作与交流项目NSFC-CIHR中加81261120566；江苏省国际科技合作计划－重点国别和地区研发合作项目BZ2011042；江苏省“兴卫工程”医学重点人才项目RC2011068；江苏省“六大人才高峰”项目苏人社发[2011]582号

在线出版日期：2016-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：172-177