固醇调节元件结合蛋白1c抑制骨骼肌胰岛素受体底物1基因表达的分子机制

摘要：

目的 探讨固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)抑制骨骼肌细胞胰岛素受体底物1 (IRS-1)基因转录的具体分子机制.方法 将SREBP-1c表达质粒、IRS-1启动子荧光素酶报告质粒及海肾质粒胸腺嘧啶核苷激酶启动子(pRL-TK)采用Lipofectamin 2000共转染L6细胞,以pCDNA3.1空质粒为对照,36 h后裂解细胞按双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明书检测荧光素酶.将表达SREBP-1c的腺病毒感染L6肌管细胞,以表达绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒作对照,感染48 h后收取细胞抽提核蛋白,进行凝胶迁移滞后实验(EMSA)和染色质免疫共沉淀(CHIP)实验,分析SREBP-1c转录因子与IRS-1启动子区域的相互作用.组间比较采用双因素方差分析.结果 荧光素酶截断实验显示IRS-1启动子区域-450~-210 bp为SREBP-1c的作用范围.序列分析显示IRS-1启动子-302~-292 bp处存在SREBP-1c潜在的结合序列GCCTCCCGAG,该序列突变为TGTTAAATTA,荧光素酶实验显示SREBP-1c抑制野生型IRS-1启动子活性,而对突变型IRS-1启动子无抑制作用(分别为7.03± 1.28比19.09±2.45、3.55±1.68比3.96±1.09,F=114.437、0.251,均P>0.05);EMSA结果显示SREBP-1c蛋白与野生型探针直接结合,而不被突变探针所竞争.CHIP结果显示SREBP-1c可直接结合到IRS-1的启动子区域,定量分析显示PA组细胞SREBP-1c结合到IRS-1启动子区域的量为对照组的2倍, SREBP-1c过表达组为GFP组的5倍(分别为2.15±0.03比1.07±0.24,5.48±1.28比0.86±0.19,t=6.8775、5.495,均P<0.05).结论 SREBP-1c通过直接结合到IRS-1启动子区域的非典型固醇反应元件序列抑制IRS-1基因转录表达,继而影响胰岛素信号通路的转导.

关键词：固醇调节元件结合蛋白1c、棕榈酸、骨骼肌、胰岛素受体底物1、分子机制

所属期刊栏目：7

分类号：R57;R5

资助基金：国家自然科学基金81270906;南京医科大学科技发展基金2013NJMU155

在线出版日期：2016-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：754-758