鸢尾素通过激活3-磷酸磷脂酰肌醇激酶-蛋白激酶B-内皮型一氧化氮合酶信号转导途径抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

摘要：

目的：探索鸢尾素对高糖培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）作用及其相关机制。方法 HUVECs加或不加磷脂酰肌醇?3?激酶（PI3K）抑制剂LY294002或（和）内皮型一氧化氮合酶（eNOS）抑制剂N?硝基?L?精氨酸甲酯（L?NAME）预培养30 min后，按是否加入鸢尾素分为6组：正糖（NG）组、高糖（HG）组、高糖+鸢尾素组、高糖+LY294002+鸢尾素（LY）组、高糖+L?NAME+鸢尾素（L?NAME）组、高糖+LY294002+L?NAME+鸢尾素（LY+L?NAME）组，培养48 h后应用原位末端标记（TUNEL）法检测各组细胞凋亡率，活性氧试剂盒及实时?聚合酶链反应（RT?PCR）检测各组细胞氧化应激水平，Western blotting法检测各组细胞蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(P?Akt)、eNOS、磷酸化eNOS （P?eNOS）水平。HUVECs以随机序列小干扰RNA(Scr?siRNA)转染作对照或以eNOS干扰RNA (eNOS?siRNA)转染沉默eNOS基因后，分成4组：正糖+Scr?siRNA（NG+Scr?siRNA）组、高糖+Scr?siRNA（HG+Scr?siRNA）组、高糖+Scr?siRNA+鸢尾素（HG+Scr?siRNA+irisin）组、高糖+eNOS?siRNA+鸢尾素（HG+eNOS?siRNA+irisin）组，培养48 h后应用膜联蛋白V?异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V?FITC/PI）双染法检测各组细胞凋亡率。采用单因素方差分析（ANOVA）法比较各组数据。结果高糖组HUVECs氧化应激和凋亡率比正糖组明显升高（25.6%±3.2%比6.0%±1.5%，t=-13.55，P<0.01），而鸢尾素组凋亡率较高糖组显著下降（19.8%±2.3%比25.6%±3.2%，t=-3.55，P<0.01）。LY组、L?NAME组和LY+L?NAME组HUVECs凋亡率均较鸢尾素组显著升高（t=-3.85、-5.19、-7.11，均P<0.01）。HUVECs的eNOS基因沉默后，高糖+Scr?siRNA组细胞凋亡率比正糖+Scr?siRNA组显著增加（58.0%±7.8%比12.4%±2.8%，t=-13.48，P<0.01），高糖+Scr?siRNA+鸢尾素组细胞凋亡率明显低于高糖+Scr?siRNA组（27.8%±5.3%比58.0%±7.8%，t=-7.84，P<0.01），而高糖+eNOS?siRNA+鸢尾素组细胞凋亡率显著高于高糖+Scr?siRNA+鸢尾素组（48.1%±5.5%比27.8%±5.3%，t=-6.48，P<0.01）。高糖组P?Akt/Akt、P?eNOS/eNOS水平比正糖组显著降低（均P<0.01），鸢尾素组P?Akt/Akt、P?eNOS/eNOS水平明显高于高糖组（均P<0.01），而LY组、L?NAME组及LY+L?NAME组P?Akt/Akt、P?eNOS/eNOS水平较鸢尾素组均显著降低（均P<0.01）。结论鸢尾素可抗高糖诱导的HUVECs氧化应激和凋亡，其保护内皮细胞的机制与激活PI3K?Akt?eNOS信号转导途径有关。鸢尾素具有潜在的防治糖尿病血管并发症的临床价值。

关键词：人脐静脉内皮细胞、鸢尾素、高糖、细胞凋亡

分类号：S51;R54

资助基金：国家自然科学基金81370896

在线出版日期：2015-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：355-361