骨髓间充质干细胞对糖脂毒性诱导的大鼠胰岛素瘤细胞损伤的保护作用

摘要：

目的：探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对糖脂毒性诱导的大鼠胰岛素瘤细胞(INS?1)损伤的保护作用及其机制。方法 INS?1细胞分为正常对照组、高糖高脂组和高糖高脂+BMSCs组。高糖高脂+BMSCs组的INS?1细胞使用高糖高脂（16.7 mmol/L葡萄糖、0.4 mmol/L棕榈酸)培养基处理48 h后，与BMSCs共培养24 h，进行检测：(1)CCK8法检测INS?1细胞存活率；(2)Western blotting检测细胞内裂解的半胱氨酸?天冬氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase?3)的表达；(3)膜连蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)检测细胞凋亡率；(4)放免法检测胰岛素分泌功能；(5) JC?1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP)；(6)二氯荧光素双醋酸盐(DCFH?DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成量。两组间比较采用t检验进行统计学分析。结果与正常对照组比较，高糖高脂组INS?1细胞存活率明显下降[(100.0%±0.8%)比(71.9%±3.2%), t=8.46, P<0.01]，Cleaved Caspase?3表达量增加(0.248±0.033比1.01±0.066,t=10.28,P<0.01)，凋亡细胞比例增加[(6.9%±0.4%)比(16.4%±1.2%), t=17.38, P<0.01]，基础胰岛素分泌量(BIS)与葡萄糖刺激的胰岛素分泌量（GSIS）均减少（t=5.745、13.559，均P<0.05）。与高糖高脂组相比，高糖高脂+BMSCs组INS?1细胞的存活率上升，Cleaved Caspase?3表达量和凋亡细胞比例均减少（t=3.98、5.16、13.08，均P<0.05），BIS及GSIS均显著增加（t=5.674、10.148，均P<0.05）。高糖高脂损伤INS?1细胞内线粒体功能，表现为线粒体膜电位去极化(96±8比46±4, t=5.239, P<0.05)、ROS生成量较对照组明显增加[(13.3%±0.9%)比(34.2%±0.8%), t=17.38, P<0.01]，而与高糖高脂组相比，BMSCs共培养有效促进线粒体膜电位恢复，并减少细胞内ROS含量[分别为46±4比87±14，(34.2%±0.8%)比(22.5%±0.4%)，t=2.822、13.080，均P<0.05]，改善了高糖高脂损伤的INS?1细胞的线粒体功能。结论 BMSCs可有效保护糖脂毒性损伤的INS?1细胞，其作用机制可能与BMSCs改善线粒体功能有关。

关键词：间充质干细胞、糖脂毒性、线粒体、INS-1细胞

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2013AA020105

在线出版日期：2015-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：316-320