C肽对晚期糖基化终末产物诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

摘要：

目的：研究C肽对晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响及其机制。方法将大鼠肾小球系膜细胞按照下列分组培养：对照组：正常培养基培养；AGEs组：培养基中含有200 mg/L AGEs；AGEs+C肽组：培养基中含有200 mg/L AGEs和5μmol/L C肽；AGEs+C肽+H89组：预先用含有H89（终浓度10μmol/L）的培养基培养30 min后加入AGEs（终浓度200 mg/L）和C肽（终浓度5μmol/L）。采用荧光法检测细胞内活性氧的水平，应用格里斯反应检测细胞一氧化氮（NO）的生成水平，采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）或Western blotting检测晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、蛋白激酶A（PKA）、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达水平。采用非参数检验（Kruskal-Wallis H检验）进行组间比较，采用Mann-Whitney U检验进行两两比较。结果 AGEs组系膜细胞生成ROS和NO较对照组增多（分别为193.7±6.4比136.1±4.9和27.2±4.7比15.5±0.7，均U=0，P<0.05），C肽可以抑制ROS和NO的产生， AGEs+C肽组的ROS和NO水平与AGEs组差异有统计学意义（分别为136.9±14.3比193.7±6.4；16.0±2.1比27.2±4.7；均U=0，P<0.05）。与对照组相比，AGEs上调RAGE的表达，下调PKA的表达，并且AGEs可上调NOX4和iNOS的表达（分别为0.565±0.027比0.148±0.006，0.085±0.035比0.518±0.019，0.912±0.055比0.105±0.012，0.279±0.003比0.126±0.004，均U=0，P<0.05）；C肽处理组较AGEs组RAGE的表达下调，PKA的表达上调，NOX4和iNOS的表达下调（分别为0.159±0.003比0.565±0.027，0.594±0.079比0.085±0.035，0.085±0.005比0.912±0.055，0.071±0.016比0.279±0.003，均U=0，P<0.05）。与C肽组比较，H89组阻断PKA激活后，ROS和NO生成增多（分别为195.7±9.3比149.7±11.7，22.2±1.1比16.4±2.1，均U=0，P<0.05），并且H89逆转C肽下调NOX4和iNOS表达的作用（H89组比C肽组分别为0.455±0.018比0.085±0.005，0.296±0.013比0.071±0.016，均U=0，P<0.05）。结论 C肽通过影响PKA信号通路抑制肾小球系膜细胞氧化应激。

关键词：C肽、系膜细胞、氧化应激、蛋白激酶A、晚期糖基化终末产物

资助基金：国家自然科学基金81370873、81370918

在线出版日期：2015-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：110-114