核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对高脂喂养小鼠肝脏炎性因子和肝脏胰岛素抵抗的影响

摘要：

目的 研究核糖体蛋白S6激酶1 (S6K1)基因沉默对肝脏炎性因子表达的影响,探讨S6K1在肝脏胰岛素抵抗中的作用机制.方法 将48只体重12.6～14.8 g的6周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为4组:普食对照组[普通饲料(ND)+含U6启动子空载体腺病毒组(pU6Ax组),即ND+ pU6Ax组]、普食实验组[ND+ S6K1短发夹RNA (shRNA)重组基因腺病毒组,即ND+S6K1Ax组]、高脂对照组[高脂饲料(HFD)+pU6Ax组,即HFD+ pU6Ax组]、高脂实验组(HFD+S6K1Ax组),分别喂养16周.实验组和对照组尾静脉分别注射S6K1Ax、pU6Ax(均为普食实验组及对照组90 ml,高脂实验组及对照组120 ml,效价为2.0×1010 pfu/ml).注射后第6天过夜饥饿后,4组各随机抽取6只行葡萄糖耐量实验,剩余的小鼠处死取肝脏,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏炎性因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10 mRNA的表达,Western blotting观察肝脏蛋白S6K1、S6K1苏氨酸389(S6K1-thr389)、胰岛素受体底物1(IRS1)丝氨酸1101 (IRS1-ser1101)、IRS1丝氨酸636/639(IRS1-ser636/639)、蛋白激酶B丝氨酸473(A kt-ser473)、c-Jun氨基末端激苏氨酸183/酪氨酸185(JNK-thr183/tyr185)表达.两组比较采用t检验,多组问比较采用单因素方差分析.结果 肝脏S6K1基因沉默后,与高脂对照组相比,HFD+ S6KI Ax组小鼠炎性因子MCP-1、TNF-α、IL-1β mRNA均表达下降(分别为0.549±0.016比0.871±0.081、0.635±0.079比0.905±0.059、0.642±0.042比1.327±0.025;t=9.55、6.71、34.07,均P＜0.05).IL-6 mRNA未表现出组间差异(P＞0.05),抗炎因子IL-10 mRNA在HFD+ S6K1Ax组肝脏S6K1基因沉默后升高(0.773±0.076比0.436±0.046,t=9.27,P＜0.05).Western blotting显示与HFD+ pU6Ax组相比,HFD+ S6K1Ax组肝脏S6K1基因沉默后,IRS1-ser1101、IRS1-ser636/639、S6K1-thr389、JNK-thr183/tyr185表达下降,Akt-ser473表达增强(t=6.59、8.44、5.37、3.15、6.52,均P＜0.05).结论 高脂喂养可引起肝脏低度炎症并介导胰岛素抵抗的发生,肝脏S6K1可能通过促进炎症因子、抑制抗炎因子表达参与了肝脏胰岛素抵抗发生.

关键词：核糖体蛋白S6激酶1、胰岛素抵抗、炎性因子、肝脏、高脂饮食

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分类号：R589.2;Q343.1;R735.7

资助基金：天津市应用基础;前沿技术研究计划资助项目

在线出版日期：2013-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：624-629